拿捏多酚多糖样本核酸提取，小白也能秒变实验大神

一、试剂盒法

1、原理：利用硅胶膜、磁珠等对核酸的特异性吸附，结合缓冲液体系，实现核酸的分离纯化。

2、步骤：按试剂盒说明书操作，通常是样本裂解后与结合液混合，转移到吸附柱或加入磁珠，经洗涤、洗脱等步骤获得核酸。

3、各个组分的原理及作用

裂解液

    原理：

（1）含SDS等表面活性剂，分子一端亲水、一端疏水。细胞的膜由磷脂双分子层构成，有疏水内核和亲水表面。SDS疏水端插入细胞膜磷脂双分子层，破坏膜结构，亲水端与水作用，使膜瓦解，释放细胞内物质。

（2）可能含蛋白酶K，作用于蛋白质肽键，通过水解切断肽链。细胞内核酸与蛋白质结合成复合物，蛋白酶K将蛋白质分解，使核酸释放。

    作用：

    使细胞破碎，释放核酸、蛋白质、多糖等细胞内物质，为后续核酸提取分离创造条件。

蛋白酶K

    原理：

    是一种丝氨酸蛋白酶，能特异性地切割蛋白质中的肽键，对多种天然蛋白质都有水解作用。

    作用：

    在裂解细胞的过程中，降解与核酸紧密结合的组蛋白、核蛋白等蛋白质，使核酸充分释放，同时也可防止蛋白质对后续核酸提取步骤的干扰。

洗涤液

    原理：

    通常由乙醇、异丙醇等有机溶剂和一定浓度的盐组成，乙醇、异丙醇等有机溶剂能使蛋白质变性沉淀，破坏蛋白质的空间结构，使其从核酸上脱离。同时，这些有机溶剂还能溶解脂质等杂质，起到去除杂质的作用。盐在洗涤液中可提供一定的离子强度，维持核酸与吸附介质之间的静电相互作用等，防止核酸因静电斥力等原因从吸附介质上脱落，保证核酸仍吸附在介质上，而杂质被去除。

    作用：

    去除与核酸共吸附的杂质，提高核酸的纯度。

洗脱液

    原理：

    一般为TE缓冲液或去离子水，TE缓冲液中的Tris是一种两性物质，在不同pH值环境下可通过质子化和去质子化来调节溶液的pH值，使溶液保持在一个稳定的pH范围，为核酸提供稳定的化学环境。EDTA能与二价金属离子如镁离子、钙离子等形成稳定的络合物，而核酸酶的活性通常依赖于这些金属离子，EDTA螯合金属离子后，可抑制核酸酶的活性，防止核酸被降解；去离子水其离子强度极低，当用去离子水作为洗脱液时，破坏了核酸与吸附介质之间的离子平衡，使核酸从吸附介质上解吸附，进入水溶液中。

    作用：

    将吸附在硅胶膜或磁珠上的核酸洗脱下来，得到纯净的核酸溶液，便于后续实验使用。

磁珠

    原理：

    磁珠表面的硅羟基在结合液存在的条件下，硅羟基上的氧原子可与核酸磷酸基团上的氢原子形成氢键，同时硅羟基带负电，核酸的磷酸基团也带负电，但在高盐环境下，阳离子的存在屏蔽了部分电荷，使两者之间的静电斥力减小，静电引力增强，从而实现磁珠与核酸的特异性吸附。

    作用：

    作为核酸的吸附载体，利用磁珠的超顺磁性，在外加磁场作用下可快速实现核酸与溶液中其他杂质的分离，操作简便、快速，适合自动化操作。

硅胶膜

    原理：

    在高盐低pH值条件下，硅胶膜表面的硅羟基质子化程度增加，带更多正电荷，与带负电荷的核酸磷酸基团之间的静电相互作用增强，同时氢键作用也增强，使核酸牢固地结合在硅胶膜上。而在低盐高pH值条件下，硅羟基去质子化，带负电荷增多，与核酸之间的静电斥力增大，结合力减弱，核酸从硅胶膜上被洗脱下来。

    作用：

    在核酸提取过程中作为固相载体，特异性吸附核酸，通过离心等操作实现核酸与其他杂质的分离，经过洗涤、洗脱等步骤可获得纯净的核酸。

4、步骤：按试剂盒说明书操作，通常是样本裂解后与结合液混合，转移到吸附柱或加入磁珠，经洗涤、洗脱等步骤获得核酸。

5、注意事项：要严格按说明书控制各步骤的时间和试剂用量，选择适合多酚多糖样本的试剂盒。

二、CTAB法

1、原理：CTAB是一种阳离子去污剂，可与核酸形成复合物，在高盐溶液中溶解，而多糖等杂质在低盐浓度下沉淀。

2、步骤：将样本研磨后加入CTAB提取缓冲液，65℃水浴使细胞裂解，加氯仿-异戊醇抽提，离心取上清，加异丙醇或乙醇沉淀核酸，70%乙醇洗涤后晾干，用TE缓冲液或水溶解核酸。

3、注意事项：CTAB浓度、提取时间和温度等会影响提取效果，多糖含量高时可增加氯仿-异戊醇抽提次数。

三、SDS法

1、原理：SDS是阴离子去污剂，能裂解细胞、使蛋白质变性，释放核酸，通过后续沉淀等步骤分离核酸。

2、步骤：样本加SDS裂解液裂解，加蛋白酶K消化蛋白质，加酚-氯仿-异戊醇抽提，离心取上清，用乙醇或异丙醇沉淀核酸，洗涤干燥后溶解。

3、注意事项：蛋白酶K的用量和消化时间要适当，防止核酸降解。酚具有腐蚀性，操作要戴手套和护目镜。

四、产品介绍