科研人必看！磁珠法RNA提取，轻松拿捏纯净RNA

一、实验原理与优势

（一）RNA提取

    RNA提取是从生物样本（如细胞、组织等）中分离出RNA的过程。这是分子生物学研究的基本技术，因为RNA在基因表达等诸多过程中起着关键作用。其主要步骤包括样本的收集与裂解，细胞裂解后会释放出RNA，然后去除蛋白质、DNA等杂质，最后对提取的RNA进行回收和浓缩。在裂解过程中，会使用含有离液剂（如胍盐）的裂解液，它能使蛋白质变性并抑制RNA酶活性，从而保护RNA。之后可以通过有机溶剂沉淀或吸附等方式来获取相对纯净的RNA。

（二）实验原理

1. 样本裂解与核酸释放

   细胞或组织样本加入含强去污剂（如SDS、Triton X - 100）及蛋白酶K的裂解液。去污剂能破坏细胞膜、核膜等生物膜结构，使细胞内容物释放；蛋白酶K则可降解蛋白质，包括与核酸结合的组蛋白等，让RNA从蛋白质-核酸复合物中游离出来。

2. 磁珠与RNA的特异性结合

    磁珠表面修饰有特殊官能团，如硅羟基。在高盐、低pH值的缓冲液环境中，RNA的磷酸基团带负电，与磁珠表面硅羟基发生静电吸附和氢键作用，实现特异性结合。同时，此条件下DNA及其他杂质与磁珠结合力弱，保证RNA的选择性捕获。

3. 磁场分离与杂质去除

    将结合RNA的磁珠置于磁场中，磁珠会聚集在磁场附近，方便去除含有蛋白质、多糖、细胞碎片等杂质的上清液。接着，用含乙醇、盐类的洗涤液清洗磁珠，乙醇可去除残留的蛋白质和盐分，盐类维持一定离子强度，在不影响RNA与磁珠结合的情况下，进一步洗净杂质。

4. RNA洗脱

    使用低盐、高pH值的洗脱液（如无RNA酶水或TE缓冲液）处理磁珠- RNA复合物。高pH值环境改变RNA与磁珠表面官能团的电荷状态，破坏二者间的静电吸附和氢键；低盐环境降低离子强度，促使RNA从磁珠上脱离，从而得到纯净的RNA溶液。

（三）优势

    提取纯度高：磁珠能特异性地吸附核酸，通过洗涤等步骤可以有效去除蛋白质、多糖等杂质，得到高纯度的核酸。

    回收率高：对核酸的吸附能力较强，能高效地从样本中回收核酸，减少核酸的损失。

    操作简便：整个提取过程可以通过自动化设备完成，人工操作步骤相对简单，降低了操作难度和工作量。

    可重复性好：磁珠法提取过程相对稳定，受人为因素影响小，实验结果的重复性高。

    安全无毒：磁珠本身性质稳定，不使用传统提取方法中可能有毒性的试剂，如酚、氯仿等，对操作人员健康和环境友好。

（四）适合磁珠法提取的样本

    血液样本：包括全血、血浆、血清等，能够从少量的血液样本中有效地提取出DNA或RNA，用于基因检测、疾病诊断等。

    组织样本：如动物组织、植物组织，能很好地从破碎的组织细胞中提取核酸，帮助进行物种鉴定、基因表达分析等。

    拭子样本：像口腔拭子、鼻腔拭子，这种样本中核酸含量相对较少，磁珠法可以有效地富集核酸，用于病原体检测等。

    粪便样本：可以提取肠道微生物的核酸，研究肠道菌群的组成和功能等。

二、实验流程

1. 样本准备

    a. 对于细胞样本，收集细胞后用PBS清洗，去除培养基等杂质。

    b. 对于组织样本，需要先将组织剪碎成小块，以便后续裂解更充分。

2. 裂解

    a. 加入适量的裂解液到样本中。裂解液一般含有去垢剂（如SDS、Triton X - 100等），可以破坏细胞膜和核膜结构，使细胞内的RNA释放出来，同时裂解液中还含有RNA酶抑制剂，以防止RNA被降解。

    b. 将样本和裂解液充分混匀后，在合适的温度（如室温或按试剂要求的温度）下孵育一段时间，确保细胞完全裂解。

3. 结合磁珠

    将磁珠悬浮液加入裂解后的样本中，充分颠倒混匀，让磁珠与RNA充分接触结合，孵育时间依据试剂盒说明，一般几分钟即可。

4. 磁吸分离

    将离心管放置在磁力架上，磁珠会迅速被吸附到管壁上，小心地去除上清液，上清液中含有未结合的杂质。

5. 洗涤

    加入洗涤液，洗涤液可以洗去磁珠- RNA复合物上残留的蛋白质、多糖和其他杂质。轻轻颠倒离心管使磁珠重新悬浮，然后再次将离心管放置在磁力架上，吸去洗涤液，此步骤通常重复1 - 2次。

6. 洗脱

    加入适量的洗脱液（一般是无RNA酶的水或TE缓冲液），使RNA从磁珠上洗脱下来，将离心管在适当的温度下孵育几分钟，然后放置在磁力架上，收集含有RNA的洗脱液。

l去除DNA步骤

    洗脱前一个步骤，取结合有核酸的磁珠，加入DNase I工作液和DNase I，震荡混匀后，再进行洗涤，洗脱。

三、注意事项

1、样本相关

    a. 样本质量：样本要新鲜，对于组织样本，取材后应尽快处理，避免RNA降解。如果不能及时处理，要保存在液氮或者RNA保护剂中。

    b. 样本量：严格按照试剂盒的要求准备样本量。样本量过多可能会导致裂解不充分、杂质过多，影响RNA纯度；样本量过少则可能导致RNA产量不足。

2、防止RNA降解

    a. 无RNA酶环境：操作前，要用RNA酶清除试剂对实验台面、移液器、离心管等进行清洁。实验人员要戴无粉手套，并且经常更换，因为皮肤表面和空气中可能存在RNA酶。

    b. 试剂选择：使用含有RNA酶抑制剂的裂解液，并且确保其他试剂都经过无RNA酶处理，比如水要使用无RNA酶的水。

3、操作过程

    a. 裂解时，要确保样本完全浸没在裂解液中，并且充分混合均匀。可以通过轻柔颠倒或涡旋振荡（如果样本允许）来实现，但涡旋不能过于剧烈，以免造成RNA断裂。孵育温度和时间要严格按照说明书进行，保证细胞或组织充分裂解。

    b. 组织样品在裂解和离心后，离心管下部可能会有一些胶状物质，宜作为上清转移至下一步操作。如果弃除胶状物，会导致得率下降约30-50%。后续加入结合液后胶状物会消失。

4、磁珠处理

    a. 磁珠悬浮液在使用前要充分摇匀，使磁珠均匀分散。加入磁珠后，颠倒混匀要轻柔，防止产生气泡，因为气泡可能会干扰磁珠与RNA的结合。

    b. 在磁吸分离过程中，要确保离心管放置在磁力架上的位置正确，使磁珠能完全被吸附到管壁。吸弃上清液时，要小心操作，避免吸走磁珠。

    c. 洗涤步骤：洗涤液的用量要准确，洗涤过程中要让磁珠充分重悬，保证洗涤效果。但也要注意避免洗涤液残留，因为残留的洗涤液可能会影响RNA的纯度和后续的实验。

    d. 洗脱步骤：洗脱液的选择和体积要按照试剂盒说明进行。洗脱时，要确保洗脱液与磁珠充分接触，并且孵育的温度和时间合适，这样才能有效地将RNA从磁珠上洗脱下来。

5、实验器具和环境

    a. 清洁和消毒：实验器具要清洁、干燥，离心管和移液器枪头最好是经过无菌、无RNA酶处理的。实验环境要保持相对稳定的温度和湿度，避免温度过高导致RNA降解或试剂变质。

    b. 仪器设备：使用的离心机等设备要定期维护和校准，确保离心力准确，因为离心力不准确可能会影响磁珠的分离和RNA的提取效果。

四、产品介绍

Fwkbio#RA606（RNA提取试剂盒磁珠法）

Fkwbio#RA606与T公司产品性能对比：

公司介绍：