动物、或植物组织匀浆处理,顾名思义就是使样品中的组织细胞被均匀破碎,打破细胞壁和细胞膜,使细胞内容物充分释放,从而提高目标物质,如蛋白质、核酸、代谢物等的提取效率。匀浆后的样品通常需要通过离心来分离细胞碎片和未破碎的细胞,从而获得含有目标分子的上清液。例如,可以在4°C下以12000g离心10-20分钟,除去细胞碎片和其他物质。
在基础的实验阶段,更细致的说,组织蛋白提取时、组织RNA提取时、做药物代谢分布情况时等等都可能需要匀浆的前处理。在这里大家也要注意!很多后续需要做western blot、qPCR的匀浆处理,一定要在冰上进行。包括在匀浆开始前,需要预冷裂解液、离心机等等。
相同时间和频率的匀浆处理也能减少人为操作的差异,比如能让某组织裂解充分,从而提高RNA提取的含量,提高实验结果的重复性和可靠性。
当然匀浆的方法多种多样,你可以采用杵头来回碾压的原始方式,或者买玻璃研磨器,也可以用组织破碎仪、匀浆机、超声破碎仪等稍微方便的工具。但是需 要注意非一次性匀浆工具要进行彻底擦拭或干净,避免不同样品之间的交叉污染。
不同硬度和结构的组织样品也可以用不同的方法,如软组织、植物细胞壁等用匀浆机或破碎仪即可,太硬的组织更能就需要超声破碎了。
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